【前言】 微生物检测工作人员每天都必须在无菌室工作中，在超净台或是生物安全柜里实际操作，为了更好地确保大家检验的精确性，大家务必规定无菌室及其操作台符合规定，那大家应当如何开展认证呢？下边大家介绍一下自然环境中无菌检测或除菌实际效果应如何检查。  

微生物检测工作人员每天都必须在无菌室工作中，在超净台或是生物安全柜里实际操作，为了更好地确保大家检验的精确性，大家务必规定无菌室及其操作台符合规定，那大家应当如何开展认证呢？下边大家介绍一下自然环境中无菌检测或除菌实际效果应如何检查。

一、紫外线杀菌灯除菌实际效果查验

紫外线杀菌灯在应用全过程中辐照度会慢慢减少，危害其除菌实际效果，故应当定期维护。紫外线杀菌灯的除菌合理光波长是253.7nm，其抗压强度可以用管理中心光波长254nm的紫外线强度计测量。在沒有紫外线强度计的状况下能够 选用分子生物学取代。

分子生物学检测简略流程以下：采用枯草枯草芽孢菌ATCC 9372，做成10⁶CFU/mL~10⁸CFU/mL浓度值的菌悬浮液；采用经脱油解决的0.5厘米×1.0cm尺寸的丝布或铝块，高压灭菌后作为媒介；每一个媒介上滴一滴制取好的菌悬浮液，干躁储备用；将八个染菌媒介放于无菌检测容器中，放置紫外线杀菌灯下1米~1.5m处，打开紫外线杀菌灯直射，于0.5h、1h、1.5h和1h各取下两个染菌媒介，各自资金投入盛满5mL缓存蛋白胨水的过柱液；系列产品稀释液后开展平板电脑记数；同法取八个染菌媒介用作阳性对照，实际操作除不经过紫外线此昂直射外与实验组同样。

消灭率=（阳性对照收购 菌数-实验组收购 菌数）/阳性对照收购 菌数×100%

消灭率超过99.9%时，觉得紫外线杀菌灯除菌实际效果达标。

二、无菌室空气指数查验

无菌室空气指数查验应依照取样方案，依据状况对处在空态、静态数据和一切正常运作的风险性区，应用适度的仪器设备收集空气中微生物菌种，测量并监管风险性区气体的微生物菌种环境污染。气体飘浮微生物菌种的取样和记数方式各种各样，依据多需取样目地决策实际的取样方式和采样器。因采样器的收集高效率不一样，应谨慎挑选适合的方式和机器设备。采样器分成两大类：主动式采样器，如落菌盘；主动型采样器，如过虑采样器、碰撞采样器、冲击性采样器等。

1.地基沉降法

落菌盘等主动式气体微生物菌种采样器不可以精确测量空气中的微生物菌种的数量，只是精确测量空气中微生物菌种在表层的地基沉降率。只需明确单位时间落菌盘里微生物菌种的总数，再依据落菌盘的曝露总面积与曝露时间之间的关联，就可以大概测算出空气中微生物菌种的总数。

总面积低于30m²的房间内设一条直线取6点，在其管理中心及其两边离墙1米处各取1点；总面积超过30m²的房间内屋子四面离墙1米和中间各置放一个平皿，高宽比为试验台高宽比。培养液平皿打开表盖曝露10min，随后盖紧外盖反放，塑造48h，记数每一个平皿上的菌体数。

日常监管时，能够 设置可接纳的菌体数限制值。一般无菌室全部的抽样平皿上的病菌数量应低于15个。空气指数优良的无菌室，一般么个平皿上生长发育的病菌不超过两个。

2.空气净化法：

气体取样除开当然地基沉降法外，还能够应用专业的主动型采样器。主动型采样器能够 评定风险性区气体微生物菌种的特点。主动型采样器关键包含过虑采样器、碰撞采样器、冲击性采样器等。

碰撞采样器能够 分成间隙式采样器、离心式风机采样器和针眼式采样器。间隙式采样器由额外的真空泵抽气泵抽真空，根据采样器的间隙式平板电脑，将收集的气体喷涌并撞到迟缓转动的平板电脑培养液表层上，粘附的活微生物菌种颗粒历经塑造后产生菌体，给予记数。离心式风机采样器因为內部离心风机的高速运转，气旋从采样器前侧吸进从后侧排出，在离心脱水机的功效下，空气中的活微生物菌种颗粒有充足的時间撞到专用型的固形塑造条上，经塑造后产生菌体，给予记数。

过虑式空气采样器是最常见、非常简单的空气采样器。过虑式采样器有取样头、过滤装置、蒸汽流量计和抽气泵构成。过虑式采样器的构造如图所示：

启动电动机后，抽气泵工作中，推动气体吸进取样头，气体通过滤装置的情况下，超过滤膜孔径的颗粒物被阻留，当做到事先设置呼吸容积后抽气泵停止工作，将滤纸取下转载到培养液上，塑造后测算空气中微生物菌种的浓度值。过虑式采样器捕捉高效率，可是滤纸原材料很有可能危害微生物菌种的成活率，也有取样摩擦阻力大、总流量易失的缺点。

在沒有空气采样器的状况下，能够 自身拼装如下图的气体错率取样设备，留意拼装相接处务必密不通风。

开启图广州中山大学瓶的水龙头，气体就被抽入无菌检测水里。待4L流水完，就会有4L气体根据瓶子中的无菌水，也就是4L空气中的微生物菌种被存留在五十米L无菌检测水里。无菌检测汲取1米L过虑的水质采样开展平板电脑记数，做两个平行面。37℃塑造48h记数。

每升空气中的病菌数为：两个平皿上病菌总数的均值×50/4。

三、无菌室物件表层微生物菌种环境污染查验

表层微生物实验室菌种环境污染的查验必须应用交流接触器或拭子，得到某表层某时间点的微生物菌种总数。

交流接触器以器皿内已经知道总面积的固体塑造物质与表层触碰，触碰总面积应超过二十厘米²，匀称用劲将全部营养成分物质压着表层几秒，不可挪动。随后将设备放回器皿内，再清理取样表层，消除残余营养物质。交流接触器塑造后呈现的菌体能够 得出原表层微生物菌种的生存情况的镜像系统“图”。

应用拭子更加简易和灵便，用拭子擦洗某一表层，它抹除的微生物菌种总数就可以测算出了。对触碰设备碰触不上的、高低不平或有凹痕的非速即大表层，用拭子取样尤其便捷。棉拭子的操作步骤以下：

提前准备原材料：自做无菌检测棉拭子或选购商业化的无菌检测棉拭子、內径10厘米×10厘米无菌检测规格型号板、无菌检测盐水、培养液平皿。

假如抽样物件是平面图的，将无菌检测规格型号板放到物件表层，用淋湿的无菌检测棉拭子在无菌检测规格型号板中空处横纵擦抹匀称，擦抹时随着旋转棉拭子，剪去棉拭子与手触碰一部分，将棉拭子放进配有一定容积的无菌检测盐水中待检。

将取样管敲击80次之上是棉拭子上的病菌充足蔓延，做适度稀释液，开展平板电脑记数，37℃塑造48h记数。

病菌数量（CFU/cm²）=（平皿上菌体平均值×稀释倍数）/取样总面积（cm²）

四、工作人员表面无菌检测查验

工作人员与检验目标的表面主要是受。

被检工作人员洗手后，五指闭拢。将泡浸过的棉拭子沿两手指妥协指根到指端来回涂擦2次，涂擦的另外旋转棉拭子。剪去作业者手触碰位置，将棉拭子放进配有一定容积的无菌室盐水中待检。

按“无菌室物件表层真菌感染查验”的方式开展试品解决、打疫苗、塑造、记数和汇报結果。