一、无菌操作原则规定

1. 打疫苗病菌时务必穿工作服装、戴工帽。     

2. 开展打疫苗食品类试品时，务必穿专用型的工作服装、帽及凉拖，应放到无菌车间缓冲间， 工作中前经紫外线杀菌后应用。      

3. 打疫苗食品类试品时，应在进无菌车间前要肥皂洗手，随后用75％酒精棉球将手擦干净。     

4. 开展打疫苗常用的塑料吸管，平皿及培养液等务必经消毒灭菌，开启包裝未应用完的容器，不可以置放后再应用，金属材料用品应高压灭菌或用95%酒精点燃灼烧三次后应用。       

5从包裝中取下塑料吸管时，塑料吸管尖部不可以碰触露出位置，应用塑料吸管打疫苗于试管婴儿或平皿时，塑料吸管尖不可碰触试管婴儿或平皿边。      

6.打疫苗试品、转种病菌务必在酒精喷灯前实际操作，打疫苗病菌或试品时，塑料吸管从包裝中取下后及开启试管婴儿塞都需要根据火苗消毒杀菌。      

7.接种环和针在打疫苗病菌前要经火苗灼烧所有铁丝，必需时也要烧到环和针与杆的相接处，打疫苗结核杆菌和最烈菌的接种环应在开水中烧开5min，再经火苗灼烧。

8. 塑料吸管汲取菌液或试品时，运用相对应的橡皮头汲取，不可立即用口吸。
       二、无菌检测间应用规定

1、无菌检测间通往外边的窗子应是双层中空玻璃，并要密封性，不可随便开启，并设立与无菌检测间尺寸相对应的缓冲间及移门，另设立0.5-0.7平米的小窗，以便进到无菌检测间后传送物件。

2、无菌检测间内要保持干净，工作中完用2%-3%煤酚皂水溶液消毒杀菌，擦洗工作中橱柜台面，不可储放与实验不相干的物件。      

3、无菌检测间应用前后左右应把门关严， 开启紫外线杀菌灯，如选用房间内悬吊训练紫外灯消毒时，需30W紫外线杀菌灯，间距在1.0M处，直射時间不少于30min，应用紫外线杀菌灯，应留意不可立即在紫外光下实际操作，以防造成损害，led灯管每过两个星期要用酒精棉球轻轻地擦洗，去除上边尘土和油污，以降低紫外光透过的危害。      

4、解决和打疫苗食品类标本采集时，进到无菌检测间实际操作，不可随便进出，如必须传送物件，可根据小窗传送。      

5、在无菌检测间内如必须装空调时，则应该有过滤系统。

三、消毒灭菌规定
微生物检验用的玻璃容器、金属材料用品及培养液、被环境污染和打疫苗的塑造物等，务必经杀菌后才能应用。杀菌方法有空气干燥和寒湿髙压蒸汽锅灭菌方法和间歇性灭菌方法
1、杀菌前提前准备

（1）全部必须杀菌的物件最先应清理晾晒，玻璃容器如塑料吸管、平皿用包装纸盒严实，如用金属材料筒应将上边通气口开启。

（2）装培养液的三角瓶盖，用纸包装好，试管婴儿盖好盖，注射针须将芯管抽出来，用沙布包好。 

2、装放

（1）干热灭菌器：装放物件不能过挤，且不可以触碰箱的四壁。

（2）大中型髙压蒸汽锅：：置放杀菌物件各自捆扎好，立即放进消毒杀菌筒内，物件中间不可以 过挤。

3、机器设备查验

（1）查验门的电源开关是不是灵便，橡胶圈有没有毁坏，是不是整平。

（2）查验气压表蒸汽排尽时是不是滞留在零位，关好门和盖，通蒸汽或加温后，观查是式压力锅或立柱式工作压力蒸汽蒸汽灭菌器的应用应按以下流程开展：

①手提压力锅在行为主体内添加3L冷水，立柱式压力锅放水16L（多次重复使用时要将水 量补充，使水变浑浊需拆换）.

②手提压力煲将机盖上的排汽管插进消毒杀菌桶内腔的方钢管中（无塑料软管或塑料软管生锈裂开的蒸汽灭菌器不可应用）。

③盖好机盖扭紧，勿使漏汽；置蒸汽灭菌器于明火上加温，立柱式压力煲通上开关电源，并开启机盖上的自动排气阀放了冷气机（水沸腾后排气管10-15min）。

④关掉自动排气阀，使蒸汽压升高到要求规定，并保持要求時间（按杀菌物件特性与相关状况而定）。

⑤做到要求時间后，对需干躁的物件，立即打开自动排气阀排出来蒸汽，待工作压力修复到零时，当然制冷至 60℃后打开表盖取放，若为液态物件，不必开启自动排气阀，而应该马上将锅除去热原，待当然制冷，工作压力修复至零，溫度降至60℃下列再打开表盖取放，防止忽然缓解压力液态强烈烧开或器皿工程爆破。   

（3）立式压力煲蒸汽蒸汽灭菌器的应用按以下流程开展：

①关严锅门，开启旁通阀，将蒸汽引进隔层开展加热，隔层内强冷空气经阻气器全自动排出来。

② 隔层做到预订溫度后，开启锅室旁通阀，将蒸汽引进锅室，锅房间内强冷空气经锅室阻气器全自动排出来。

③待锅室做到要求的工作压力与溫度时，调整旁通阀，使维持稳定。

④当然或人力减温至60℃再开关门取放，不可应用迅速排出来蒸汽法，防止忽然降血压，液态强烈烧开或器皿工程爆破。

⑤应用全自动系统控制式工作压力蒸汽蒸汽灭菌器，在摆好物件关严门后，应依据物件类型按 动相对应电源开关，便于按要求程序流程全自动开展杀菌，杀菌时务必运用附属仪表盘纪录溫度与時间以备查簿，实际操作规定应严苛依照生产厂家使用说明开展。

四、杀菌后处理工艺

杀菌后物件，按一切正常状况已属无菌检测，从蒸汽灭菌器中取下应认真仔细置放，以防再一次环境污染。    

1.物件取下，随后查验包裝的一致性，若有毁坏或棉塞脱下，不能做为无菌检测物件应用。   

2.取下的物件，若为包裝有显著的浸水者，不能做为无菌检测物件应用。

3.培养液或实验试剂等，应查验是不是合乎做到杀菌后的颜色或情况，未做到者应废料。

4.开闭式器皿，在取下时要将圆孔筛关掉。

5.取下的物件坠落在地或误放不干净的这个，或粘有水湿，均视作遭受环境污染，不能做为无菌检测物件应用。

6.取下的达标杀菌物件，应储放于储物间或防污柜里，禁止与未杀菌物件混存。

7.凡属达标物件，应标着杀菌日期及有效期。

8.每次杀菌解决进行后，纪录杀菌产品名、总数、溫度、時间、作业者。

五、有害有菌废弃物解决规定

微生物实验常用实验器材、塑造物等没经消毒杀菌解决，一律不可带出实验室。

1、经塑造的环境污染原材料及废料应放到严实的器皿或细铁丝筐内，并集中化储放在特定地址，待统一开展高压灭菌。

2、经微生物环境污染的塑造物，务必经121℃30min高压灭菌。

3、染菌后的塑料吸管，应用后放进5%煤酚皂水溶液或石炭酸液中，至少泡浸24小时（消毒杀菌液态不可小于泡浸的高宽比）再经121℃30 min高压灭菌。

4、玻片上色清洗片的液态，一般可立即冲进下水管道，最烈菌的清洗液务必冲在量杯 中，经高压灭菌后才可倒进下水管道，上色的装片放进5%煤酚皂水溶液中泡浸24小时后，烧开清洗。做凝结实验用的装片或平皿，务必高压灭菌后清洗。

5、粉碎的塑造物，马上用5%煤酚皂水溶液或石炭酸液喷撒和泡浸被环境污染位置，泡浸三十分钟后再擦洗整洁。

环境污染的工作服装或开展最烈实验所穿的工作服装、帽、防护口罩等，应放进专用型消毒杀菌袋内，经高压灭菌后才能清洗。

六、培养液制取规定

培养液制取的品质将立即危害微生物生长发育。由于各种各样微生物对其营养成分规定不完全一致，塑造目地的不一样，各种各样培养液制取规定以下：

1、依据培养液秘方的成份按量称量，随后溶解纯净水中，在应用前对运用的实验试剂药物应开展产品质量检验。

2、PH 测量及调整：PH测量要在培养液冷至室内温度时开展，因在热或冷的状况下，其PH有一定差别，当测量费力罗，按测算量添加碱或酸搅拌后，应再检测一次。培养液 PH值一定要精确，不然会危害微生物的生长发育或危害結果的观查。但特别注意因高压灭菌可危害一些培养液的 PH 减少或上升，故不适合杀菌工作压力过高或频次过多，以防危害培养液的品质，显色剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调过PH后再添加。

3、培养液需维持回应，以便观查病菌的生长发育状况，培养液加温烧开后，可以用药棉 花或丝绒布过虑，以去除沉淀，必需时可以用鸡蛋回应解决，常用琼脂条要事先清洗晾晒后应用，防止因琼脂含残渣而危害清晰度。

4、盛放培养液不适合用铁、铜等器皿，应用清洗的中性化硬质的玻璃器皿为好。

5、培养液的杀菌既要做到彻底杀菌目地，又要留意不因加温而减少其营养成分，一般121℃15min就可以，若为带有不抗高烧化学物质的培养液如糖原、血清蛋白、果胶等，则应选用超低温杀菌或间歇性法杀菌，一些不可以加温的实验试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌药等，待基本琼脂高压灭菌后凉至50℃上下再添加。

6、每次培养液制取好后，应做无菌检测生长发育实验及所检菌种生长发育实验。如果是生物化学塑造 基，应用规范菌种打疫苗塑造，观查生化反应結果，应呈一切正常反映，培养基不应贮存太久，必需时可置4℃电冰箱存放。

7、现阶段各种各样干躁培养基较多，每次要用规范菌种开展生长发育实验或生化反应观查，各种各样培养基用相对应菌种生长发育实验优良后才可运用，新购入的或存放太久的干躁培养基，在配置时也应测PH，应用时要依据产品手册使用量和方式开展。

8、每次制取的培养基常用化学药品、杀菌状况及菌种生长发育实验結果、制作人等应搞好纪录，以便查看。