洁净室（无菌室）的使用和管理

洁净室(无菌室)是微生物检测的重要场所和最基本的设施，是微生物检测质量保证的重要物质基础。洁净室(无菌室)标准应符合GMP洁净度标准。

因此，洁净室设计必须按照国家标准《洁净现场设计规范》、国家药品监督管理局发行的《药品检验所实验室质量管理规范(试行)》第18条规定执行。

微生物实验室洁净室的施工、设置、检查应按照国家行业标准洁净室的施工和检查规范进行。对于微生物检测工作者和使用管理者来说，更多的工作是正常管理到日常使用。

洁净室(无菌室)的使用管理应实现以下工作:

1.洁净室(无菌室)应符合规范要求

无菌实验室装修应采光良好，避免潮湿，远厕所和污染区域。面积一般在10m2以下，在5m2以上的高度在2.4m以下。

由1~2个缓冲间、操作间构成(操作间和缓冲间的门不能直接对应)，操作间和缓冲间应具有灭菌功能的样品传递箱。

缓冲室内应有洗脸盆、毛巾、无菌裤的放置架和挂钩、拖鞋等，不得放置培养箱和其他垃圾的无菌室内应六面光滑平整，耐清洗消毒。墙壁和地板、天花板的连接处应呈凹弧形，无间隙，无死角。

操作期间不得安装下水道。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度为100级放置同等级超净工作台，室内温度控制18-26℃，相对湿度45%-65%。

缓冲室和操作室应设置能够达到空气消毒效果的紫外线灯和其他适当的消毒装置，空气清洁水平不同的相邻房间的静压差应大于5Pa，清洁室(区)和室外大气的静压差应大于10Pa。

无菌室内照明灯嵌在天花板上，室内照明均匀分布，照明度在300lx以上。缓冲间和操作间设置的紫外线杀菌灯(2-2.5w/m3)应定期检查放射强度，要求操作面达到40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。

2.建立注册制度

可在注册簿上设置日期、时间、使用者、设备运行状况、温度、湿度、清洁状态(沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数)、修理原因、修理结果、清洁工作(桌面、地板、墙面、天花板、传递窗、门把手)、消毒液名称等。

3.建立使用标准操作规范(SOP)

(2)物品进入洁净室(无菌室)的基本要求:进入洁净室(无菌室)的物品必须在第一缓冲室内用消毒剂消毒外部表面，在物流缓冲室、传送窗户1小时以上，无菌空气干燥后送入无菌室。注意不要带纤维、容易灰尘的东西去净化实验室。无菌室内固定物品不得随意搬出。

(3)人员进入洁净室(无菌室)要求:实验人员进入洁净室(无菌室)不得化妆、手表、戒指等饰品，不得吃、嚼口香糖。清洁手后，进入第一缓冲室更衣，同时更换消毒隔离拖鞋，脱下外套，用消毒液消毒手套，更换无菌连衣帽(不得暴露在外面)，戴无菌口罩。然后，更换或戴上第二个无菌手套，进入第二个缓冲间时更换第二个消毒隔离拖鞋。通过淋浴室30s淋浴进入无菌室。

(4)温湿度观察要求:观察温度计、湿度计显示的温湿度在规定范围内，作为实验原始数据记录在案件中。如果发现问题，应及时找出原因，及时报告实验室主管，并记录报告原因和结果。

(5)沉降菌落计数和浮游菌测定要求:在每次实验的同时，在操作室和层流台上进行微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，作为实验环境的原始数据记录在实验报告书上。每周一次或无菌检测等必要时，每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测量，将结果记录在使用登记本上，作为实验环境的原始数据记录在实验报告上。

(6)消毒要求:无菌室每周和每次操作前使用0.1%的新洁尔消毒或2%的甲酚液或其他适当的消毒液(常用消毒剂的品种为5-20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%的新洁尔消毒液、1:50的84消毒液、75%的羟基醇溶液、3%的碘酒溶液、5%的石炭酸(来苏儿)消毒溶液、2%的二面水溶液、尼泊金乙醇消毒液(处方:对基苯甲酸甲酯21.5g的清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐渐向外退出清洁区域。然后打开无菌空气过滤器和紫外线灯杀菌1-2h，杀死微生物。每次操作结束，同样用上述消毒溶液擦拭桌面，去除室内湿气，用紫外线灯杀菌30min。无菌室是怎样管理的

(7)其他要求:停电时，立即停止实验，离开无菌室。关闭所有的电门。在重新进入无菌室之前，至少打开机械室运行1小时以上。

4.洁净度检测的要求和方法

无菌室消毒处理后，无菌试验前和操作中必须检查空气中的落数，判断无菌室是否达到规定的清洁度

(1)沉降菌检测方法和标准:无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区的桌面左、中、右各放置1个平板盖，在空气中暴露30min后，将平板盖在32.5℃

(2)浮游菌检测方法和标准:使用专用采样器，采用冲击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，配备流量计和定时器，严格按照仪器说明书的要求进行操作和定时校正，采样器和培养器进入测量室前消毒室消毒剂灭菌，使用的培养基础是营养琼脂培养基础和药典认可的其他培养基础。使用时，首先启动真空泵抽气，时间在5分钟以上，调节流量、转盘、转速。关闭真空泵，放入培养盘，盖上取样罩，调节间隙高度。放置采样口采样点后，依次打开采样器、真空泵，旋转定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养盘放置32.5℃士2.5培养48h，取出检查，浮菌落数平均不得超过5个/m3。

每批培养基应选择3个培养盘进行比较培养。无菌操作台或超净工作台应定期检测悬浮颗粒，达到100级(一般用尘粒计数器)检测，根据无菌情况必要更换过滤器。

5.定期进行清洁度再验证

定期(每季度、半年、一年)或清洁室设施发生重大变化时，按国家标准GB/T16292-16294-2010《医药工业清洁室(区)悬浮粒子、悬浮菌和沉降的测试方法》进行清洁度再验证，确保清洁度符合规定

定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评价，根据评价结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况和变化趋势，决定是否需要修改相应的警戒和纠偏限度。

6.定期更换新的紫外线灯
更换净化系统的初效、中效、高效的头定期更换新的紫外线灯，确保紫外线灯的灭菌持续有效。同时在使用登记本上创建更换记录，定期存档保存。

至少2年1次，或者根据清洁度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效的头部。确保净化系统的功能持续有效，同时在使用注册簿时制作交换记录，定期存档保存。

7.在使用过程中应尽量减少人员的行走或活动

平时实验室内应尽量减少人员的行走或活动，同向洁净室的门应关闭或安装自动关闭门。

8.如果清洁度不符合规定，立即停止使用

如果发现清洁度不符合规定，立即停止使用，寻找原因，完全清洁，必须在清洁度检验符合规定后再使用

9.对进入的外来人员或维护人员进行指导和监督

非微生物室检查人员不得进入洁净室(无菌室)，对必须进入的外来人员或维护人员进行指导和监督。

10.洁净室无菌室日常管理

建立安全卫生值日制度，发现换气系统、墙壁、天花板、地板、门窗、公共介质系统等设施有损坏，应立即报告并采取相应的修复措施，保存记录并立即归档。

从洁净室(无菌室)环境中检测到的微生物可以鉴别到属或种类，保留鉴别实验的原始记录和菌种，作为无菌生产、无菌检测洁净室环境质量、消毒剂有效评价和污染源调查的依据，也为无菌检测阳性的调查提供了第一手资料。
 

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