微生物实验室的常用仪器设备及使用的注意事项

4月26日，国家卫生委员会召开全国视频会议，明确提出所有县区级以上疾病对策机构、二级以上综合医院应紧急改造，在短时间内形成核酸检测能力。

各地公立机构的检验能力不能满足需求只是暂时的，独立医学实验室在充实检验能力的同时，发挥自己丰富的检验管理运营理念，以及地区化垄断的经验优势，融入国家队核酸检验能力的建设

随着各地建立PCR实验室，本文从硬件基础的角度整理了PCR实验室建设的几个要点，独立医学实验室运用丰富的运营经验，建设指导

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如何建设PCR实验室

以下是PCR实验室建设过程中的几个重要控制点，根据实验室的具体情况制作质量系统，制作《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》，保证管理系统的运行效果。

管理系统的特点是明确的目的、规范的管理、有效的制约、高效的机制、能够自我发展的整体。

建立完善的SOP文件，规定完成各种质量活动的方法，各SOP应对一组相互关系的活动进行说明。

每个SOP文件都应该说明这个质量各个环节的输入、转换和输出所需要的文件、物资、人员、记录以及与相关活动的界面关系。

明确各环节转换过程中各要素的要求，即谁做、什么、什么程序、达到什么要求、如何控制、形成什么记录和报告以及相应的审查手续。

规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施。SOP应简洁明了，易于理解，员工应熟练掌握和严格遵守。

02PCR实验室关设置

完成一组PCR实验，通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩张和产品分析四个实验过程。

这四个实验过程的实验室应相邻配置，构成独立的PCR实验区。标准的PCR实验区包括试剂准备区、标本准备区、扩展区、产物分析区、各区辅助缓冲区和公共走廊。

pCR实验室整体平面布局

某医院PCR实验室平面布局如图1所示，整个区域都有公共走廊，每个独立实验区都有专门的缓冲区。通过压差控制，在PCR实验中试剂和标本不受气溶胶污染，减少扩大产品对人员和环境的污染。

图表1、某医院PCR实验室平面图

试剂准备区

这个实验区主要进行的操作是储存试剂的制备、试剂的分装和主反应合液的制备。

试剂和用于标本制作的材料应直接运输到该区域，不得通过其他区域。试剂原材料必须储存在本区，并在本区制备必要的储存试剂。

试剂准备区配备2~8°C冰箱和-80°C冰箱，计算冷负荷时，需要计算。

房间面积应控制在15m2~20m2。本区压力梯度要求为：相对正压状态，防止外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染。

标本制备区

这个区域主要进行的操作是临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)的提取、保存、增加反应管和测定RNA时的cDNA的合成。

标本制备区配备2~8°C冰箱和-20°C冰箱，计算冷负荷时需要计算。在标本制备区域，还需要配备生物安全柜来提取核酸。

微生物实验室区分及要求

为了避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性的结果，该区域配备的生物安全柜必须为B2型。生物安全柜工作区域的垂直气流均来自实验室，排气经高效过滤器过滤后直接排到室外，不得返回安全柜和实验室。

根据经验，在实验室内设置生物安全柜时，每台设置一台，实验室面积增加10m2的标本制备区域的面积应在25m2~30m2之间。本区压力梯度要求为：相对于邻近区为正压，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

扩展室

这个区域主要进行的操作是DNA或cDNA扩展。另外，制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂的贮藏和制备区)制备的反应混合液等也可以在本区内进行。

在巢式PCR测量中，通常在第一次扩张后必须打开反应管，因此巢式扩张具有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

展室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪，本文实例使用ABI7500和ABI9700两种PCR仪。

在实验室建设过程中，需要为PCR仪配备专用的UPS电源，保证其正常工作。该区域的面积控制在15m2~20m2。

本区的压力梯度要求为:相对于相邻区域为负压，以免气溶胶从本区泄漏。为了避免气溶胶造成的污染，应尽量减少本区内不必要的行走。个别操作，如样品，应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差，在控制方面比较容易实现。

产物分析区域

该区域主要进行的操作是扩展片段的测定。如果使用全自动封闭分析仪器进行检测，则该区域不设置。

在室内设置通风柜，保证室内相对负压，空气从室外流向室内。该区域面积控制在15m-20m。

本区域是最主要的扩展产品污染源，因此本区域的压力梯度要求为:相对于邻区域为负压，避免扩展产品从本区域扩展到其他区域。建议采用5~10Pa压差，在控制方面比较容易实现。

正负压区缓冲室安装

根据压力梯度的要求，试剂配制室和样品处理室相对正压，扩展室和产物分析室相对负压，要求正压区和负压区缓冲室的压力设计大不相同。

正压缓冲室符合一般正压洁净室的缓冲原则，主要是防止室外环境空气中的气溶胶进入室内。正压缓冲室的布置如图2所示。

正压缓冲室布局图

负压缓冲室要求缓冲室对核酸扩展室和产物分析区保持正压，缓冲室外也保持正压(主要满足室内净化需求，如果室内没有清洁要求，可以作为0压)。负压缓冲室的布置如图3所示。