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NGS实验室又叫高通量测序检测实验室。NGS是下一代测序技术即高通量测序技术的简称。高通量测序技术是对传统Sanger测序(称为一代测序技术)革命性的改变, 可同时对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 也称为深度测序。
NGS实验室临床应用的基本条件
1.1必须拥有符合临检中心相关规定的标准NGS实验室。
1.2检测设备必须符合标准NGS实验室设置要求:高通量测序仪及配套服务器;高通量测序检测试剂盒;通用电脑;自动分析软件,实验室样本信息管理系统等。
1.3检测人员必须通过专门的技能培训,并获得省级以上卫生计生行政部门颁发的临床基因扩增检验技术上岗证书。NGS实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等,确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求,确保检测结果准确、确保实验室卫生安全,确保实验室长期稳定运行。
1.4NGS临床应用必须在无菌无尘环境下进行操作。
NGS实验室建设基本要求
2.1主体结构主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
2.2标准的各区分隔和气压调节将检测过程分成试剂准备、样本制备、PCR扩增和高通量测序四个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个检测实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。可打开缓冲区和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
2.3消毒在每个实验区和缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在各区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
2.4机械连锁不锈钢传递窗试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
2.5地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。
2.6照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
2.7平面布局NGS实验室应根据自己的检验项目、所采用的检测技术平台和工作量来决定分区的多少及各区域的空间大小,至少具体需要多少个区,同样是“个体化”的,以“工作有序、互不干扰、防止污染、报告及时”作为基本原则。
各项目实验室建设标准
产前筛查与产前诊断(全基因组低拷贝测序技术)
1.实验室平面图
▲图1:产前筛查与诊断实验室平面图
2. 技术流程图
▲图2:产前筛查与诊断技术流程图
3. 技术参数分区
压力 温度 相对 湿度照明专用
走廊0Pa
缓冲区+5Pa
试剂准备室+15Pa 20-25℃ 40%~60% 主实验室≥300LX,其余房间200~300LX
标本与文库制备区 +10Pa
文库扩增与检测区 -5Pa
测序区 -10Pa
4.分区功能
4.1试剂准备室
主要功能:在NGS过程中使用到的试剂的配制、分装和保存。
4.2标本与文库制备区
主要功能:血液处理、血浆制备、DNA提取、DNA片段化、DNA样品的纯化、DNA浓度检测、末端修复、接头连接、构建样本的测序文库。
4.3文库扩增与检测区
主要功能:文库构建后的PCR扩增与纯化、文库浓度检测、文库的混合及混合后的质检分析。
4.4测序区
主要功能:测序模板制备(乳液PCR与磁珠富集回收)、上机测序、数据分析、报告审核及发放。
5.仪器配置
5.1试剂准备室
主要仪器设备:加样器、冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯和超净工作台等。
5.2标本与文库制备区
主要仪器设备:冷冻离心机、微量台式离心机、掌上三管离心机、涡旋震荡器、垂直混合仪、移液器、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、托盘天平、Qubit 2.0核酸定量仪、电脑(可连接互联网)、条形码打印机、普通打印机、扫描枪、磁力架等。
5.3文库扩增与检测区
主要仪器设备:PCR仪、QPCR仪、Qubit2.0核酸定量仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、UPS、冰箱、移液器、磁力架等。
5.4测序区
主要仪器设备:高通量测序仪、PC电脑、打印机、UPS、恒温金属浴、纯水仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、超净工作台、可移动紫外灯、磁力架、PCR仪等。
n胚胎植入前遗传学诊断(全基因组低拷贝测序)
1. 实验室平面图
▲图3:PGD实验室平面图
▲图4:PGD技术流程图
3. 技术参数
分区 压力 温度 相对 湿度照明
专用走廊 0Pa
缓冲区 +5Pa
试剂准备室 +15PaWGA
制备室 +10pa 20-25℃ 40%~60% 主实验室≥300LX,其余房间200~300LX
扩增一区 -5pa
标本检测区 -10Pa
测序区 -15Pa
电泳区 0Pa
4. 分区功能
4.2WGA制备区
主要功能:基因组DNA释放、全基因组DNA扩增。
4.3电泳区
主要功能: DNA电泳检测及结果反馈、DNA打断等
4.4扩增一区
主要功能:DNA片段的末端修复与纯化、接头连接与纯化、文库混合、缺口平移。
4.5文库检测区
主要功能:文库浓度质检分析。
4.6测序区
5.1试剂准备区
主要仪器设备:冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯和超净工作台等。
5.2电泳区
主要仪器设备:电泳仪、微波炉、凝胶成像仪、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等。
5.3WGA制备区
主要仪器设备:PCR仪、超净工作台、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等。
5.4扩增一区
主要仪器设备:PCR仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、UPS、移液器、磁力架等。
5.5文库检测区
主要仪器设备: QPCR仪、Qubit2.0核酸定量仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、冰箱、移液器等。
5.6测序区
n遗传病诊断+肿瘤诊断与治疗(杂交捕获测序技术+Sanger测序验证)
▲图5:肿瘤诊断实验室平面图
▲图6:肿瘤诊断技术流程图
▲图7:一代测序实验流程图
分区 压力 温度 相对湿度 照明
洁净走廊 0Pa
试剂准备室 +15Pa
DNA打断区 +10Pa 20-25℃ 40%~60% 主实验室≥300LX,其余房间200~300LX
杂交捕获区(扩增一区) -5Pa
文库扩增区(扩增二区) -10Pa
文库检测区 -10Pa
电泳区 0 Pa
4.1试剂准备区
主要功能:样本接收、样本前处理、全基因组DNA提取以及各种样本DNA或者RNA的提取、DNA片段化、DNA纯化、DNA浓度测定、DNA片段的末端修复与纯化、接头连接与纯化。
4.3DNA打断区
主要功能: DNA打断(片段化)。
4.4电泳区
主要功能:片段化DNA电泳检测及结果反馈。
4.5杂交捕获区(扩增一区)
主要功能:目的DNA片段的杂交捕获与纯化,Sanger测序目的片段扩增与纯化、Sanger测序PCR前准备。
4.6文库扩增区(扩增二区)
主要功能:杂交捕获后扩增与纯化、文库浓度质检分析、及Sanger测序的PCR扩增反应与纯化。
4.7测序区
主要功能:测序模板制备(乳液PCR与磁珠富集回收)、上机测序、及Sanger测序。
主要仪器设备:微量台式离心机、掌上三管离心机、恒温金属浴、移液器、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、托盘天平、Qubit 2.0核酸定量仪、PCR仪、电脑(可连接互联网)、条形码打印机、普通打印机、扫描枪等。
5.3DNA打断区
主要仪器设备:Covaris S220超声波打断仪、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等。
5.4电泳区
5.5杂交捕获区(扩增一区)
主要仪器设备:PCR仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器等。
5.6文库扩增区(扩增二区)
主要仪器设备:PCR仪、Qubit 2.0核酸定量仪、微量台式离心机、掌上三管离心机、涡旋震荡器、移液器、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、磁力架等。
5.7测序区
主要仪器设备:高通量测序仪、Sanger测序仪、PC电脑、打印机、UPS、恒温金属浴、纯水仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、超净工作台、可移动紫外灯、磁力架、PCR仪等。
常规微生物实验室设计
,又叫做细菌检验操作室。细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室,主要的设施是jrs免费体育直播NBA
。
常规微生物实验室设计对实验台通风柜有以下要求:
a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m;
b.实验台位置应在实验室中心位置中央实验台,要有充足光线;也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头;
d.实验台中间设置试剂架,架上装有日光灯与插座;
e.常规微生物实验室设计实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜。
f.设置通风柜以满足加热、消化、干燥、烧灼和化学处理等工作需要;
g.仪器室可以和微生物常规实验室合并,用以放置显微镜、电子天平及理化分析用小型仪器;
(1).要求清洁干燥、防潮防虫、避光;
(2).仪器台要稳固、牢靠。
普通实验室平面图.实验室设计图纸实验室设计图纸
一个好的实验室我们应该如何设计
1.实验室整体规划设计
2.实验室通风设计
3.实验室水电气设计
4.实验室废气处理设计
5.实验室科学功能设计
实验室设计师说不同类型的实验室布局迥异,平面布局规划需要针对特定的实验工艺进行,需要设计人员熟悉实验室设备仪器、实验流程和实验室管理,并具有前瞻思想,预留一定的发展空间
实验室集中供气设计
一、实验室供气需求
实验室中使用的仪器有原子吸收分光光度计、气相色谱质谱仪、子荧光光度计、气相色谱仪、电感耦合等离子质谱仪等,都需要使用高纯载气和燃气,所以实验室就要考虑如何将这些气体供到各实验室中放置的分析仪器。
二、实验室供气现状
实验室供气主要是采用高压钢瓶、液体杜瓦瓶、集中供气系统,而集中供气系统是较为优秀的方式,作为当今实验室设备使用高纯气体的可靠连续的供应源,气体通过管道系统输送至实验室内,并可通过安装在工作台上的使用点二级减压器方便地调节压力和流量。
三、实验室用气体的危险性:
1、有部分气体具有易燃、易爆、有毒、强腐蚀等特性,其一旦泄漏,就可能会对工作人员及仪器设备造成伤害;
2、多种气体在同一个环境下使用,容易发生燃烧或爆炸等强烈化学反应的气体同时泄漏,就可能对工作人员产生伤害;
3、多数气瓶出口压力高可达15MPa,即150公斤/cm2,如果发生气瓶口减压装置失灵,就有可能将一些部件激射出去,其能量对人体或设备都具有致命性的伤害。
四、集中供气系统的优点
1、单独的气瓶间,尽量设计在人流较少的区域,这种方式是将人与仪器隔离分开,当发生泄漏的时候可以避免造成直接伤害。
2、根据根据气体性质分别集中在一个气瓶间中(其实主要是将易燃易爆气体(如H2、天燃气、乙炔等)与助燃气体(如氧气、氯气)分开存贮)。
3、每种气体可以将多瓶气体并联然后通过一个出口统一减压后运送气体至使用点。因为气瓶间是相对独立的,整个气路系统压力大的地方也是气瓶出口处,因此这种方式将气瓶压力可能发生的危险缩小至气瓶间内,可对人体及仪器的伤害降低。
五、集中供气系统主要组成部分
1、实验室气体管道:气体管路多采用不锈钢管、软管通过卡套式连接自动焊接等安装和特殊气体管道安装完成整个系统的连接。
2、气体管道常用零部件主要有减压器、球阀、针阀、直通、三通、等等。
关于实验室集中供气设计可找中南,中南从事实验室行业15年,专业提供实验室净化工程、实验室集中空气系统、实验室建设规划、实验室家具定制及安装等一站式整体解决方案。
武汉得创净化工程有限公司——清洁室空气净化行业协会会生企业,洁净技术专家委员会主任委员单位,电子洁净技术委员会主任委员企业,公司有着多种发明专利潜心无尘车间、诊室、实验室净化处理去湿防静电工程、通风空调工程、自动化技术控制技术。业务流程包含电子器件、药业、化工厂、食品类、仪器仪表、金属、光学、处理芯片、半导体材料、锂电池光伏新能源、航空公司、核电厂等民用型行业。公司注册资本3100万余元,其前身为中航院洁净技术研究所,创立于1989年9月。公司内设九部一办,辖16个省份工作部门。很多年来,公司一直坚持“诚实守信赢领将来”的企业发展理念和“遵纪守法诚实守信、以以德治国企、创新管理、改革创新”的公司发展战略方针,借助机器设备,深厚的工艺能力和充足的作业工作经验,潜心电子器件、半导体材料、锂电池、太阳能发电、光学、金属、新能源技术、精密的机器设备、药业、化工厂、食品类、航空公司、核电厂等行业无尘车间、洁净厂房、诊室、实验室等洁净室工程、防静电工程项目、通风空调工程、自动化技术控制技术。20很多年来在国内各地承包完成了数家洁净厂房、无尘车间、净化手术室、实验室等净化室净化工程实例,每个工程项目都以安全性、迅速遭受顾客和世界各国权威专家的一致五星好评。
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