基因扩增实验又称PCR实验室,其特点是能将微量的DNA大幅增添,PCR是分子生物学研究和实验的通例方式,普遍应用于生物学各个领域。例如:艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子判定及法医物证、动植物检疫,动物及其衍生产物检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。
一、PCR实验室结构
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物剖析区四个单独的事情区域并设有专用走廊,各事情区域应设缓冲间,事情区与缓冲间宜安装连锁装置。差别功效的事情区应是离开自力的,各事情区有显著的标志,不能直通,若是慎密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严酷离开。实验质料、试剂、记录纸、笔、清洁质料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物剖析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各事情区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。
二、实验室各区功效及主要装备
1、试剂准备区:主要举行试剂的制备、分装和主反映混合液的制备。试剂和用于样品制作的质料应直接运送至该区,不得经由其它区域。试剂原质料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要装备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。对于气流压力的控制,本区并没有严酷的要求。
2、样品制备区:主要举行样品的保留、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反映管和测定DNA的合成。本区主要装备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为:相对于相近区域为正压,以制止从相近区进入本区的气溶胶污染。
3、扩增区:主要举行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反映混合液(来自试剂准备区)制备成反映混合液等也可在本区内举行。本区主要装备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。本区的压力梯度要求为:相对于相近区域为负压,以制止气溶胶从本区漏出。
4、扩增产物剖析区:扩增产物的测定。本区主要装备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。本区的压力梯度的要求为:相对于相近区域为负压,以制止扩增产物从本区扩散至其它区域。
三、PCR实验室透风系统及压力控制
各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的珍爱屏障,制止实验之间的相互滋扰,防止气溶胶扩散对实验历程造成污染。PCR实验室并没有严酷的净化要求,然则为制止各个实验区域交织污染的可能性,宜接纳全送全排的气流组织形式,严酷控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
四、PCR实验室装饰
实验室围护结构应牢靠、气密性好。所有阴阳角宜接纳圆弧过渡,墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒。地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,质料应知足无裂缝、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
五、PCR实验室注意事项
1、几个区域的巨细设置情形,试剂准备区、扩增区、扩增产物剖析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物平安柜和低温冰箱,空间应大一些。
2、试剂准备区、样品制备区设紧要洗眼器,以保证操作职员的平安。
3、PCR实验室没有严酷的净化要求,可以凭据用户的使用情形和资金的投入选择。